中藥活性成分是其發(fā)揮臨床療效的物質(zhì)基礎(chǔ)。近年來,，國(guó)內(nèi)外研究人員以親和色譜或親和質(zhì)譜為核心,，構(gòu)建了系列在線活性篩選平臺(tái)，從中藥中獲取了大量的活性成分,。然而,，這些篩選體系通常以化學(xué)成分響應(yīng)值的降低或者探針底物響應(yīng)值的升高為標(biāo)準(zhǔn)判定活性配體。由于未能實(shí)現(xiàn)配體-蛋白質(zhì)復(fù)合物的直接檢測(cè),，并且難以評(píng)估配體與蛋白質(zhì)的結(jié)合強(qiáng)度,，篩選出來的化合物往往是活性較低的常量成分。此外,，各類非特異性結(jié)合還導(dǎo)致了大量假陽性結(jié)果的發(fā)生,。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn)，北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥現(xiàn)代研究中心屠鵬飛/宋月林研究團(tuán)隊(duì)在前期創(chuàng)建在線能量分辨質(zhì)譜（Anal Chem, 2019, 91, 15040; Anal Chim Acta, 2017, 953, 40）,、肽圖分析（RSC Adv, 2022, 12, 9868）以及“代謝組-蛋白組”雙組學(xué)同步分析方法（Anal Chim Acta, 2019, 1069, 89）的基礎(chǔ)上,，建立了柱后注射-液相色譜–能量分辨親和質(zhì)譜系統(tǒng)（PCI-LC–ER-AMS），同步檢測(cè)（1）潛在配體響應(yīng)值是否降低,；（2）蛋白質(zhì)響應(yīng)值是否降低,；（3）配體-蛋白質(zhì)復(fù)合物相關(guān)離子是否出現(xiàn)；（4）配體-蛋白質(zhì)結(jié)合能力強(qiáng)弱,。通過“四合一”測(cè)定,，實(shí)現(xiàn)中藥中活性成分的高效、準(zhǔn)確篩選,。該研究以細(xì)胞色素C（Cyt C）為示范,，采用PCI-LC–ER-AMS從中藥中“鉤釣”活性配體，并成功應(yīng)用于常用中藥黃芩中Cyt C配體的在線篩選,，從黃芩中捕獲24個(gè)潛在活性成分,。進(jìn)一步利用分子對(duì)接、表面等離子共振（SPR）,、紫外-可見光譜（UV-Vis）以及細(xì)胞活性驗(yàn)證等手段對(duì)潛在活性進(jìn)行驗(yàn)證,，結(jié)果表明篩選捕獲的化合物均能與Cyt C結(jié)合，并且結(jié)合能力與相應(yīng)的OCE值呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系,。
該團(tuán)隊(duì)建立的具有“四合一”檢測(cè)性能的PCI-LC–ER-AMS平臺(tái),，實(shí)現(xiàn)了中藥中Cyt C配體的快速、準(zhǔn)確篩選,，為中藥中活性先導(dǎo)化合物的高效發(fā)現(xiàn)提供了有力工具,。相關(guān)研究結(jié)果以Online ligand screening for cytochrome C from herbal medicines through “four-in-one” measurement為題發(fā)表在中科院一區(qū)Top期刊Pharmacological Research（https://doi.org/10.1016/j.phrs.2024.107406）。相關(guān)方法已申請(qǐng)發(fā)明專利（申請(qǐng)?zhí)枺?024113073930）
中藥學(xué)院博士研究生李婷和張珂為論文共同第一作者,，屠鵬飛教授和宋月林研究員為共同通訊作者,。該項(xiàng)研究得到了國(guó)家自然科學(xué)基金（82474202和82030114）,、中央高校基本科研基金費(fèi)（2024-JYB-JBZD-052）以及國(guó)家中醫(yī)藥管理局高水平中醫(yī)藥重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目—中藥分析學(xué)科的資助,。