國(guó)家自然科學(xué)基金重大重點(diǎn)項(xiàng)目
近年來(lái)，我校作為項(xiàng)目牽頭單位承擔(dān)了國(guó)家自然科學(xué)基金重大重點(diǎn)項(xiàng)目7項(xiàng),，立項(xiàng)總經(jīng)費(fèi)達(dá)2277萬(wàn)元,，這些項(xiàng)目為解決中醫(yī)藥學(xué)科關(guān)鍵基礎(chǔ)科研問(wèn)題提供了重要的理論指導(dǎo)和技術(shù)支持。項(xiàng)目在執(zhí)行過(guò)程中,，科技處積極協(xié)助處理項(xiàng)目管理工作,，通過(guò)科研人員的通力合作，6個(gè)結(jié)題項(xiàng)目全部通過(guò)基金委組織的的專家驗(yàn)收,，并在基礎(chǔ)研究方面取得了顯著的科研成果,，為后續(xù)的項(xiàng)目驗(yàn)收奠定了良好的基礎(chǔ)。
項(xiàng)目名稱：穴位敏化的客觀顯像研究
項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：李志剛
成果介紹：
項(xiàng)目以穴位敏化客觀成像研究為中心,，運(yùn)用光聲成像進(jìn)行膝骨關(guān)節(jié)炎,、心肌梗死模型動(dòng)物的穴位敏化的微血管形態(tài)成像研究；運(yùn)用激光散斑成像技術(shù)進(jìn)行穴位敏化的微循環(huán)灌注量研究,，完成了穴位敏化的組織微循環(huán)層次的客觀顯像研究,；本項(xiàng)目運(yùn)用軟X射線納米CT完成穴位敏化的細(xì)胞結(jié)構(gòu)3D成像,；運(yùn)用傳統(tǒng)甲苯胺藍(lán)染色、透射電鏡,、免疫熒光等技術(shù)進(jìn)行穴位敏化細(xì)胞水平的2D成像,，完成了穴位敏化的細(xì)胞層次客觀顯像研究；本項(xiàng)目運(yùn)用金納米微粒構(gòu)建可活體標(biāo)記敏化重要分子5-HT的分子探針,，并在膝骨關(guān)節(jié)炎,、心肌梗死模型2種動(dòng)物載體上應(yīng)用活體熒光和磁共振兩個(gè)成像平臺(tái)對(duì)不同疾病小鼠進(jìn)行連續(xù)動(dòng)態(tài)的成像觀察，實(shí)現(xiàn)了穴位敏化的分子層次的客觀顯像研究,。
項(xiàng)目在執(zhí)行期內(nèi)完成全部研究既定目標(biāo),，并取得以下成果：
（1）首次搭建了對(duì)小鼠活體穴區(qū)檢測(cè)的光聲成像的平臺(tái)與方案實(shí)現(xiàn)了對(duì)小鼠膝關(guān)節(jié)、肘部穴區(qū)及背部穴區(qū)的活體動(dòng)態(tài)成像,，并編寫了用于分析穴區(qū)光聲成像數(shù)據(jù)的基于 MATLAB 軟件的計(jì)算代碼,，完成了本項(xiàng)目光聲成像數(shù)據(jù)分析。
（2）首次搭建了對(duì)小鼠穴區(qū)組織透析液中肥大細(xì)胞成像的納米 CT 成像平臺(tái),，并制定了本項(xiàng)目組的分割方案,，即基于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)、前期電鏡研究的先驗(yàn)知識(shí)等,，對(duì)納米 CT 斷層掃描的單層圖像進(jìn)行手動(dòng)分割,，隨即進(jìn)行 LAC 運(yùn)算，結(jié)合形態(tài)綜合判斷與確認(rèn)亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),。最終基于 AMIRA 軟件對(duì)所分割亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的內(nèi)徑,、體積和密度進(jìn)行量化分析。
（3）利用納米金顆粒成功偶聯(lián) IR780,、PEG 化 Fe3O4 及 Anti-5-HT antibody,，合成了能夠特異性活體標(biāo)記 5-HT，并且在光學(xué),、磁共振兩種平臺(tái)成像的生物分子探針。
本研究獲取了穴位敏化局部由生理“沉寂”狀態(tài)到病理“敏化”狀態(tài)以及疾病不同程度的客觀顯像與動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù),，通過(guò)量化結(jié)果揭示穴位敏化的特征性改變,，豐富與完善了腧穴理論。同時(shí),，本項(xiàng)目開發(fā)了穴位敏化的分子顯像探針,，為客觀呈現(xiàn)穴位敏化過(guò)程提供了先進(jìn)、可靠的工具,。 本項(xiàng)目已完成組建一支長(zhǎng)期合作,、多學(xué)科交叉的高層次創(chuàng)新研究隊(duì)伍。已在國(guó)際會(huì)議或國(guó)內(nèi)外有影響的期刊發(fā)表論文 20余篇,，另有 3 篇在審稿中,，4 篇在撰寫中,。 項(xiàng)目組成員在本項(xiàng)目基礎(chǔ)上，申請(qǐng)并成功獲得 8 項(xiàng)科研項(xiàng)目資助,，累計(jì)資助經(jīng)費(fèi)396.8萬(wàn)元,，包含 1 項(xiàng)國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃，一項(xiàng)國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目,，4項(xiàng)國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目,，以及2項(xiàng)中央高校基本科研項(xiàng)目,。依托本項(xiàng)目,，項(xiàng)目組成員先后共獲各類獎(jiǎng)項(xiàng)14項(xiàng)；依托本項(xiàng)目，共培養(yǎng)博士后1名,，博士6名,，碩士12名，項(xiàng)目成員中完成職稱晉升3人,。
1)運(yùn)用光聲成像進(jìn)行膝骨關(guān)節(jié)炎模型及心肌梗死模型動(dòng)物的穴位敏化的微血管形態(tài)成像研究以及運(yùn)用激光散斑成像進(jìn)行穴位敏化的微循環(huán)灌注研究，完成了穴位敏化的組織微循環(huán)層次的客觀顯像研究,。
2)運(yùn)用軟 X 射線納米 CT 完成穴位敏化的細(xì)胞結(jié)構(gòu) 3D 成像,，運(yùn)用傳統(tǒng)甲苯胺藍(lán)染色、透射電鏡,、免疫熒光等技術(shù)進(jìn)行穴位敏化細(xì)胞水平的 2D 成像,，完成了穴位敏化的細(xì)胞層次客觀顯像研究。 3)運(yùn)用金納米微粒構(gòu)建可活體標(biāo)記敏化重要分子 5-HT 的分子探針,，并在膝骨關(guān)節(jié)炎,、心肌梗死模型 2 種動(dòng)物載體上應(yīng)用活體熒光和磁共振兩個(gè)成像平臺(tái)對(duì)不同疾病小鼠進(jìn)行連續(xù)動(dòng)態(tài)的成像觀察，實(shí)現(xiàn)了穴位敏化的分子層次的客觀顯像研究,。經(jīng)各組非穴區(qū)提取的微透析液刺激后的肥大細(xì)胞,，胞內(nèi)充滿較多高密度的顆粒，未見低密度顆粒及空泡,，在第 14d,、21d 細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)無(wú)明顯變化，參見圖48,。經(jīng)各組陽(yáng)陵泉穴穴區(qū)提取的微透析液刺激后的肥大細(xì)胞,，模型組在第 14d 可見有顆粒脫出，低密度顆粒出現(xiàn),，顆粒膜與細(xì)胞膜相融合,；在第21d，顆粒密度進(jìn)一步降低出現(xiàn)空泡樣結(jié)構(gòu),，與透射電鏡所示在體結(jié)果相一致,。
